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超敏型 ECL化学发光底物试剂盒

2017/3/11 22:29:26

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详细介绍

超敏型 ECL化学发光底物试剂盒


下载:超敏型 ECL化学发光底物试剂盒

 

试剂盒组成:

货号

组份

数量

价格

ECL-P-100

A 

50mL

310

B 

50mL

说明书

ECL-P-500

A 

250mL

1218

B 

250mL

说明书

 

储存:避光保存,室温可保持稳定两年以上;长期不用,建议置于?C保存延长有效期。


对于不同的蛋白丰度和曝光灵敏度,可选择不同类型的ECL化学发光底物试剂盒:

 超敏型 ECL化学发光底物试剂盒(超敏型ECL发光液)可达到高飞克级灵敏度,且有超长的保质期,  /Product/2450382332.html

如需要更高灵敏度,可选择低飞克级的极敏型 ECL化学发光底物试剂盒(极敏型ECL发光液),  /Product/1082953028.html

如蛋白丰度较高,可以选择纳克级的增强型 ECL化学发光底物试剂盒(增强型ECL发光液),以达到更好的曝光效果,  /Product/0294753539.html 。

一、产品简介

ECL化学发光底物试剂盒,常称为ECL发光液,属于非放射性发光系统,用于检测固定在膜上的带HRP标记的蛋白或核酸。超敏型ECL化学发光底物试剂盒(超敏型ECL发光液)采用了新型发光增强系统:1,发光强度更高,具有灵敏度高、背景低的特点,最低检测灵敏度可达高飞克(femtogram)级,适用于检测痕量蛋白或核酸;2,发光信号持久,所采用的独特配方足以维持24小时以上的发光,便于反复曝光操作。与普通 ECL 发光液相比,可明显减少一抗和二抗的使用量,且保质期长,可在室温长期保存。

 

二、原理:

超敏型ECL化学发光底物试剂盒(超敏型ECL发光液)用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体、抗原或者核酸。蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上,以HRP标记的抗体或探针结合膜上的目的蛋白或核酸,洗膜后置于本产品配制的ECL工作液中,室温孵育数分钟,HRP使工作液中的鲁米诺(Luminol)氧化并发光,试剂中添加的增强剂可以使得这种发光大大增强。此光经X光胶片或者电子装置感光记录下来,可清晰显示蛋白质或核酸条带。

 

三、产品优点:

高飞克级灵敏度——高灵敏性,能快速检测更广泛的蛋白范围,最低可检测约300飞克(femtogram)的蛋白量。

信号稳定——发光时间长,能进行多次曝光,30min仍可保持约90%的发光强度,24小时后仍能维持60%以上的发光强度。

信号强——发光信号比经典的对碘苯酚增强的 HRP-鲁米诺检测体系更强。

稳定性高——试剂盒可在室温长期稳定存放。

节约抗体——需要更少(稀释更多)的一抗和二抗,特别节省抗体(推荐用量:一抗0.02-1.0μg/mL,二抗4-20ng/mL)

 

四、使用方法:

1. 印迹膜制备:执行常规电泳、转膜、HRP标记的抗体或者HRP标记的核酸探针孵育、洗膜;ECL工作液含有HRP催化的发光底物,检测系统必须基于HRP酶标记的抗体或者核酸探针。充分的洗涤对于降低背景非常重要,所有步骤均在室温下完成。

2. ECL工作液的配置:在使用前取等量A液和B液,混合均匀并尽快使用;将膜片置混合液中,于室温下孵育约1分钟,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片,注意不要在膜片表面形成气泡。

3.蛋白或核酸信号显现:

1). 用平头镊钳住膜片,垂直置于吸水纸上以吸去过量试剂,仅留下少量液体覆盖表面,不可让膜完全干燥;

2). 将膜片置于保鲜膜上,吸附蛋白面朝上,小心赶尽气泡;

3). 用电子装置感光,或在暗室中用X光片曝光;

4). 根据信号的强弱适当调整曝光时间,也可选择不同时间多次曝光,以达最佳效果。

 

五、安全性:

无特殊毒性,按普通化学品处理。如果不慎与眼、皮肤和衣物接触,请立刻用大量清水冲洗。

 

六、注意事项:

1.由于不同品牌的抗体质量不同,以及抗体的保存条件和保存时间的不同,初次使用时建议对抗体用量进行优化,以取得最优效果。

2.勿将ECL化学发光底物试剂盒(ECL发光液)暴露在阳光或强光下,否则会导致其失活;建议保存在棕色瓶中,并避免长时间暴露在阳光下,实验室光照对试剂盒影响不大;除了X光胶片曝光和洗片处理外,所有步骤均不必在暗室中操作。

3.使用充足的洗涤缓冲液、封闭液、抗体稀释液和底物工作液去覆盖印迹膜,以确保印迹膜处于湿润状态;使用大量的封闭液和洗涤液能减少非特异性信号的产生。

4.使用前配制ECL工作液,体积足够覆盖膜片即可;取A液和B液时一定要用不同的枪头,互相污染可能导致缓慢失活;配制完毕建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低;弃去使用过的混合试剂。

5.印迹膜与ECL工作液孵育后约2 min时发出的光最强,然后随着时间的延长而缓慢减弱,至30min仍可保持90%的光信号,至24小时仍可保持约60%的光信号;蛋白点荧光较弱时可以适当延长曝光时间;使用过少的ECL工作液不利反应进行,为达节约目的可将膜剪小,但勿降低ECL工作液使用比例。

6.使用生物素/亲和素体系时,避免使用脱脂奶粉作为封闭液,因为脱脂奶粉中含有多种内源性生物素,容易产生非特异性信号。

7. 避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

8. 金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子,建议使用塑料的平头镊子。

9.叠氮化钠(NaN3)能抑制HRP活性,应避免使用NaN3,如必须使用,浓度不要超过0.01%

10. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;戴手套可以避免在膜上留下手印,保持膜的干净。

11.本产品仅供研究使用。

 

 

常见问题:


问题

可能原因

解决方案

胶片反相(白色条带,黑色背景)

 


体系中HRP过量

 


HRP标记物稀释10倍以上

印迹膜上出现棕色或黄色条带

膜在暗室中发光出强烈荧光

发光信号持续时间短于8小时

 

 

信号太弱或者无信号

体系HRP

消耗过快

HRP标记物稀释10倍以上

抗原或抗体不足

提高抗原或抗体浓度

蛋白转移率低

优化电转条件

HRP或者底物活性太低

**参考下面的注释

 

 

 

背景过高

体系中HRP过量

HRP稀释10倍以上

封闭不充分

优化封闭条件

封闭试剂不合适

更换封闭液

清洗不充分

延长清洗时间、次数及清洗的体积

胶片曝光过度

减少曝光时间

抗原或抗体的浓度过高

减少抗原或抗体的浓度

 

蛋白条带为点状

蛋白电转失败

优化电转条件

膜未平衡

按说明书将膜平衡

膜和胶片之间有气泡

曝光之前去除气泡

出现非特异性条带

体系中HRP过量

HRP标记物稀释10倍以上

SDS引起的非特异性结合

Western blot 过程中避免使用SDS

                     **检测底物的活性:准备1-2mL底物工作液,于暗室中加入1μL稀释的HRP结合物,工作液将会立马发出荧光,随后荧光淬灭。

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